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ACE C18-Amide - 超惰性,可獲得蕞佳性能和可重現性
點擊次數:48 發布時間:2019-04-07

水准仪进行角度测量的仪器
• 用于方法開發的替代選擇性
• 改善極性、酸性、堿性和酚類化合物的分離
• 用于UHPLC和HPLC的高柱效2μm、3μm、5μm和10μm顆粒
• 超惰性,可獲得蕞佳性能和可重現性

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水准仪器测量实训报告
■ 相對C18和C8色譜柱,對極性分子 - 特別是酸類,具有替代選擇性
■ 與100%水含量的流動相兼容
■ 用于UHPLC、HPLC和制備型分離的高柱效2μm、3μm、5μm和10μm顆粒
■ UV和LC/MS兼容性的低流失

水准仪器测量知识
■ 小分子水溶性分析物和極性化合物
■ H鍵給予體、酸類、堿類和酚類化合物
■ 小分子多肽

 

 

 

 

為什么ACE C18-Amide液相色譜柱可以提供替代選擇性?

■ ACE C18-Amide將C18與極性酰胺基結合在單一配體上
■ 延長間隔區技術可以額外延長色譜柱的使用壽命

 

利用ACE C18-Amide液相色譜柱的選擇性能力將色譜峰分開
分離度方程可以確定影響分離度的參數:N、α和k。近年來,
重點關注使用超高效“UHPLC”色譜柱(如ACE Excel 2μm色
譜柱)作為實現分離目標的手段。

然而,選擇性往往被忽視。

在影響分離度的三個參數中,選擇性是最為重要的(參見圖1)。

通過利用柱效和選擇性,通常可以實現更好和更快的分離。
ACE C18-Amide液相色譜柱是ACE系列鍵合相的蕞新產品,其可以提供互補選擇性和2μm、3μm、5μm和10μm粒徑的選擇,以開發堅固耐用的UHPLC和HPLC方法。

圖1 N、α和k對分離度(Rs)的影響
對于N = 10,000、k = 4和α= 1.1的典型分離

增加N、α或k可以增加分離度(Rs),但是從上圖可以看出,N或k的增加都會迅速降低回報率。增加選擇性(α)則不會發生這個問題,因此其在開發分離方法時是這三個變量中最為重要的優化參數。

 

利用ACE鍵合相的固定相選擇性能力將色譜峰分開
圖2闡明了兩種ACE鍵合相即C18-Amide與C18之間的差異。

盡管這兩種鍵合相均可以提供可能的來自它們各自C18鏈的強疏水作用,但嵌入C18-Amide相中的酰胺基會引入額外的相互作用模式,最終增加極性化合物的保留并提供替代選擇性。

樣品:1)間苯二酚 2)兒茶酚 3)2-甲基間苯二酚 4)4-甲基鄰苯二酚5)3-甲基鄰苯二酚 6)4-硝基鄰苯二酚
流動相:25:75乙腈/27mM H3PO4(溶于水中)
色譜柱尺寸:150 x 4.6mm

流速:1.50ml/min

溫度:30℃
波長:270nm

 

ACE C18-Amiede液相色譜柱可以使極性選擇性增強

ACE C18-Amide與刢先C18 UHPLC色譜柱的比較

 

色譜柱尺寸:50 x 2.1mm
樣品:1)間苯二酚 2)兒茶酚 3)2-甲基間苯二酚 4)4-甲基鄰苯二酚 5)3-甲基鄰苯二酚 6)4-硝基鄰苯二酚
流動相:25:75甲醇/25mM H3PO4(溶于水中)
流速:0.30ml/min
溫度:30℃

波長:214nm
比較數據不代表所有應用。

 

利用替代選擇性來進行方法開發

酸性、堿性和中性化合物的分離

樣品:1)甲基苯基亞砜 2)吲哚洛爾 3)3-羥基ben甲酸 4)1,2-二甲氧基苯 5)小檗堿 6)楊梅素 7)胡椒堿 8)白楊素
流動相:A = 20mM甲酸銨(溶于水中)(pH 3.0)B = 20mM甲酸銨(pH3.0)(溶于90:10(v/v)甲醇/水中)

梯度:在5分鐘內3 – 100% B
色譜柱尺寸:50 x 2.1mm

流速:0.60ml/min

溫度:40℃

波長:254nm

 

與100%水含量的流動相兼容

葡萄酒中有機酸的分離

樣品:1)草酸 2)酒石酸 3)蘋果酸 4)乳酸 5)抗壞血酸 6)檸檬酸
流動相:40mM NH4H2PO4(溶于水中)(pH 2.5)
色譜柱:ACE Excel 3 C18-Amide, 250 x 2.1mm

流速:0.21ml/min

溫度:25℃

波長:214nm

 

ACE C18-Amide可以提供替代選擇性

食品和飲料添加劑 - 香草醛

 

樣品:1)香草酸 2)4-羥基ben甲酸 3)香草醛 4)4-羥基ben甲醛 5)愈創木酚 6)乙基香草醛 7)丁香酚
流動相:A = 0.1%甲酸(溶于水中) B = 0.1%甲酸(溶于乙腈中)

梯度:在10分鐘內30 – 55% B
色譜柱尺寸:150 x 4.6mm

流速:1.00ml/min

溫度:40℃

波長:260nm

 

類固醇

 

樣品:1)潑尼松 2)潑尼松龍 3)雌三醇 4)皮質酮 5)11a-羥孕酮 6)11-酮孕酮 7)21-羥孕酮 8)β-雌二醇 9)17α-雌二醇 10)17α-乙炔基雌二醇
流動相:A = 0.1%甲酸(溶于水中) B = 0.1%甲酸(溶于乙腈中)

梯度:在10分鐘內25 – 80% B
色譜柱尺寸:50 x 2.1mm

流速:0.40ml/min

溫度:25℃

波長:260nm

 

有保證的可重現性和完全可擴展性

ACE C18-Amide的可重現性擴展

樣品:1)尿嘧啶 2)4-羥基ben甲酸 3)乙酰水楊酸 4)ben甲酸 5)2-羥基ben甲酸 6)對羥基ben甲酸乙酯
流動相:35:65乙腈/0.1%TFA(溶于水中)

溫度:22℃

波長:254nm

將可用的2μm、3μm、5μm和10μm粒徑與從UHPLC到制備型HPLC規模的一系列柱尺寸相結合,可確保方法可重現地放大或縮小。
圖8中的色譜圖顯示,當硅膠批次和硅烷批次改變時可以獲得卓越的可重現性,并當粒徑和柱直徑改變時可以獲得可重現的可擴展性。

 

 

 

產品的可用性和規格

 

 

官能團 

封端

粒徑(µm)

孔徑(Å)

表面積(m2/g)

碳載量

最大pH范圍

100%水相兼容

USP列表

ACE C18-Amide  

具有完整酰胺極性基團的十八烷基   

2, 3, 5, 10

100

300

16.4  

2.0-8.0a

Yes

L1/L60

 

 

 

為了獲得蕞佳色譜柱壽命,推薦使用2-8的pH范圍。為了在較高的pH值下增加色譜柱壽命,必須考慮有機緩沖液、低緩沖液濃度、高%有機溶劑和低溫。
為了在HPLC條件(高達5000psi/350bar)下進一步延長色譜柱壽命,推薦使用ACE保護柱芯柱或ACE HPLC柱前過濾器。
為了在UHPLC條件(高達15000psi/1000bar)下進一步延長色譜柱壽命,推薦使用ACE UHPLC柱前過濾器。
對于高達5000psi(350bar)的HPLC色譜柱連接器,推薦使用PEEK手緊接頭(p/n ACE-CC10)。
對于高達15000 psi(1000bar)的UHPLC色譜柱連接器,推薦可重復使用的接頭(p/n EXL-CC10)。

ACE®Advanced Chromatography Technologies Limited的注冊商標。ACE Excel™Advanced Chromatography Technologies Limited的商標。Advanced Chromatography Technologies Limited承認Agilent Technologies Inc.Phenomenex Inc.Thermo Fisher ScientificWaters Corporation的注冊和未注冊商標,且與上述這些公司沒有任何隸屬關系。

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